產品名稱：多聚半乳糖醛酸酶(PG)測試盒50管/24樣
檢測方法：可見分光光度法
產品規(guī)格：50管/24樣
產品貨號：BH-9611403-2
產品分類：光合作用系列

商品介紹：

測定意義：

多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)是一種細胞壁結合蛋白，可以催化果膠分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解，參與果膠的降解，使細胞壁結構解體，導致果實軟化，與果實成熟、葉和花的脫落、病原物防御，細胞伸展發(fā)育以及木質化有關，在植物抗病性和食品貯藏保鮮領域具有較高的研究價值。

測定原理：

多聚半乳糖醛酸酶水解果膠酸生成半乳糖醛酸，具有還原性醛基，與DNS試劑反應生成紅棕色物質，在540nm有特征吸收峰，測定540nm處吸光值變化可計算得多聚半乳糖醛酸酶活性。

自備實驗用品及儀器：

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。

產品優(yōu)點如下：

1、快速簡便：全程約2小時，可測50例左右樣本。

2、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放6個月有效。

3、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。

4、回收試驗： X =97%。

5、受外界影響因素小：干擾因素少，重復性強。

6、測試面廣：可測動物血清（漿）、組織等。

通用規(guī)則：

1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。

3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。

4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。

8、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。

10、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。

注意事項：

①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

④底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

實驗結果判斷我有妙招：

1、定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應的物質要密封，并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。

樣品的準備：

細胞樣品的準備：對于貼壁細胞，吸凈細胞培養(yǎng)液，用4℃或冰浴預冷的PBS或生理鹽水洗滌一遍，按照每100萬細胞加入100～200μL的比例加入本試劑盒提供的SOD樣品制備液，適當吹打以充分裂解細胞；對于懸浮細胞，600g離心5分鐘收集細胞，用4℃或冰浴預冷的PBS或生理鹽水洗滌一遍，按照每100萬細胞加入100～200μL的比例加入SOD樣品制備液，適當吹打，以充分裂解細胞。4℃約12000g離心3～5分鐘，取上清作為待測樣品。

組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl，含有0.16mg/ml肝素鈉)灌流清除血液后獲取組織樣品。取適量的組織樣品，按照每10mg組織加入100μL SOD樣品制備液的比例在4℃或冰浴進行勻漿(可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器)。4℃約12000g離心3～5分鐘，取上清作為待測樣品。

血漿或紅細胞樣品的準備：用抗凝管收集血液，顛倒混勻。4℃ 600g離心10分鐘，移取上清至另一新的1mL離心管中，適量生理鹽水稀釋后即可作為血漿樣本進行檢測。紅細胞樣品可以參考步驟1a懸浮細胞樣品的制備方法，或其它不含Triton X-100等去垢劑的樣品制備方法。

上述樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。通常10～20μg蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中的SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考)。每種樣品準備20～100μg蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用本試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟組織10%勻漿液(組織和勻漿液的重量比為1:10)上清，通常需要稀釋10～100倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70℃凍存，但建議盡量當天完成測定。

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側柄褐孔菌Fuscoporia│discipes 質量規(guī)格：BRP53抗體雷帕霉

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